研究论文
郭林林, 潘迪, 郑田, 付凌云, 徐旖旎, 廖佳佳, 钮晓淑, 沈祥春
目的 研究V-Maf鸟类肌筋膜纤维肉瘤癌基因同源物G(V-Mafavian musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene homolog,MAFG)在氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)改善胆汁淤积性肝纤维化中的作用。 方法 将6周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为5组,分别为对照组,模型组[采用0.1%的3,5-二乙氧羰基-1,4-二氢-2,4,6三甲吡啶(3,5-diethoxycarbonyl-1,4-dihydro-2,4,6-collidine,DDC)饲料],阳性对照组[奥贝胆酸(Obeticholic acid,OCA 5 mg·kg-1)],OMT低、高剂量组(OMT 25 mg·kg–1和50 mg·kg–1)。每日给药一次,给药27 d后处死小鼠。检测小鼠血清中AST、ALT、TBA和TBIL水平,采用HE和Masson染色观察小鼠肝组织病理变化和胶原沉积情况,通过免疫组织化学实验观察α平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)、纤连蛋白(fibronectin,FN)和MAFG的蛋白表达。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测α-SMA、Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ)、Ⅲ型胶原(collagen type Ⅲ)、FN以及MAFG的蛋白水平。以转化生长因子1(Transforming Growth Factor-β1,TGF-β1)诱导人肝星状细胞(LX-2)活化建立肝纤维化体外模型,实验分为对照组、模型组(10 ng·mL–1 TGF-β1)、OMT低、高浓度组(2 μmol·L–1、10 μmol·L–1)。采用Western blot检测各组细胞中α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、FN和MAFG蛋白的表达。采用慢病毒转染技术构建稳定过表达和敲低MAFG的LX-2细胞系,检测上述肝纤维化相关蛋白表达情况。 结果 OMT能明显改善DDC诱导的胆汁淤积性肝纤维化(P<0.05),显著降低胆汁淤积型小鼠血清中AST、ALT、TBA和TBIL的表达水平(P<0.05)。OMT可明显下调小鼠肝脏内的纤维化相关蛋白α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、FN和MAFG的蛋白水平(P<0.05)。OMT可抑制TGF-β1诱导的LX-2细胞纤维化相关蛋白和MAFG的蛋白水平(P<0.05)。过表达和敲低LX-2细胞中的MAFG蛋白,发现肝纤维化相关蛋白与MAFG蛋白发生同向变化。 结论 OMT显著改善DDC诱导的胆汁淤积性肝纤维化,其机制可能是通过下调MAFG蛋白表达而发挥的,MAFG可能是治疗胆汁淤积性肝纤维化的潜在靶点。